近期,遼寧省腫瘤醫院生物治療研究中心研究人員發表論文,旨在N端截短的羧肽酶E(N-terminal truncated carboxypeptidase E,CPEΔN)是一個新的腫瘤轉移相關蛋白。本研究旨在篩選高表達CPEΔN的H1299肺癌細胞株,為完成小鼠活體成像實驗創造條件。研究指出,篩選出高表達CPEΔN的H1299肺癌細胞株,為活體成像實驗的開展創造了條件,也為進一步解釋CPEΔN促進腫瘤轉移的分子機製奠定了基礎。該文發表在2015年第06期《中國肺癌雜誌》上。
構建CPEΔN的慢病毒表達載體。分別用CPEΔN慢病毒表達載體或對照慢病毒空載體轉染H1299細胞,2μg/m L的嘌呤黴素加壓篩選。Western blot分析CPEΔN蛋白的表達,熒光素酶報告基因實驗分析熒光素酶對底物的分解作用。
結果顯示, 當感染倍數(multiple of infection,MOI)是20時,慢病毒對H1299細胞的轉染效率可以達到80%。CPEΔN高表達H1299細胞株(H1299-CPEΔN)和對照慢病毒載體表達H1299細胞株(H1299-control)中CPEΔN蛋白的表達量為4:1。H1299-CPEΔN和H1299-control均能夠有效分解熒光素酶底物,可以滿足活體成像實驗的需求。