近期，首都醫科大學附屬北京安貞醫院研究人員發表論文，旨在鑒定人核因子κB（NF-κB）p65核定位信號（NLS）缺失突變質粒即pc DNA3.1（+）-NF-κBp65ΔNLS（簡稱NF-κBp65ΔNLS）的表達功能，以及其對低表達NF-κBp65的A549細胞株即A549/NF-κBp65 shRNA細胞增殖、遷移和粘附能力的影響。研究指出，通過基因突變技術構建無NLS的NF-κBp65真核表達質粒，可明顯增強A549/NF-κBp65shRNA細胞株內NF-κBp65 mRNA和蛋白的表達水平，並使NF-κBp65蛋白定位於細胞漿內；同時，細胞漿內過表達NF-κBp65ΔNLS蛋白可明顯增強A549/NF-κBp65 shRNA細胞的增殖、遷移和粘附能力，提示滯留於細胞漿內的NF-κBp65仍可通過影響NF-κB信號通路相關蛋白參與調節肺癌細胞的生物學行為。該文發表在2015年第01期《中國呼吸與危重監護雜誌》上。
培養人A549/NF-κBp65 shRNA細胞株，分為對照組、轉染pc DNA3.1（+）組、轉染NF-κBp65ΔNLS組。應用間接免疫熒光、實時熒光定量-PCR和Western blot技術檢測NF-κBp65的細胞內定位及mRNA、蛋白表達水平的變化；應用MTT、Transwell和細胞粘附實驗分析轉染NF-κBp65ΔNLS質粒對A549/NF-κBp65 shRNA細胞增殖、遷移、粘附能力的影響。
結果顯示， 成功構建人NF-κBp65ΔNLS真核表達質粒。轉染NF-κBp65ΔNLS質粒的A549/NF-κBp65 shRNA細胞與對照組及轉染pc DNA3.1（+）組比較，NF-κBp65 mRNA表達水平明顯上調（10.63±0.84比1.04±0.21和1.23±0.22，P<0.01），NF-κBp65蛋白表達水平明顯升高（1.07±0.06比0.53±0.02和0.59±0.04，P<0.01），且NF-κBp65蛋白主要位於細胞漿內，在腫瘤壞死因子α刺激後NF-κBp65蛋白並未明顯進入細胞核。與對照組及轉染pc DNA3.1（+）組比較，轉染NF-κBp65ΔNLS質粒的A549/NF-κBp65 shRNA細胞的增殖、遷移和粘附能力均有不同程度增強。
