吳以嶺教授
（續３月27日Ｃ10版）
RT-PCR技術 RT-PCR技術檢測結果顯示（表２），與正常組（圖３，見３月２７日Ｃ10版）相比，氣虛組炎症相關COX-1、COX-2，氧化應激相關iNOS、SOD，血管舒縮相關eNOS和ECE基因表達水平顯著升高（P<0.05或P<0.01），PCS基因表達水平變化無統計學差異，通心絡治療後COX-1、COX-2、iNOS、SOD、eNOS和ECE基因表達顯著降低（P<0.05或P<0.01），PCS基因表達升高（P<0.05）。與正常組相比，氣滯組炎症相關COX-1、COX-2，氧化應激相關iNOS，血管舒縮相關eNOS和ECE基因表達顯著升高（P<0.01），抗炎PCS和抗氧化SOD基因表達顯著降低（P<0.01），通心絡治療後COX-1、COX-2、 iNOS、eNOS、ECE的基因表達降低（P<0.01）；PCS和SOD的基因表達升高（P<0.01）（圖４、５）。
內皮損傷相關基因的SAGE譜
以炎症和氧化應激相關基因全長cDNA序列為探針, 每個基因都在SAGE文庫中釣取一個唯一與之相對應的SAGE Tag，這一SAGE Tag在Unigene數據庫中搜索結果顯示，與該Tag唯一匹配可信的Unigene是在GenBank中已登錄並經NCBI編輯整理的基因，證實該Ｔag與目前所登錄的基因是一一對應的。利用SAGE數據庫的在線工具對內皮細胞中這7組基因的表達豐度進行分析。結果顯示，在正常情況下，COX-1、COX-2、iNOS、PCS基因的表達量很少或不表達，而eNOS、ECE、SOD的表達量較多。
大鼠具有抗自發性及實驗性動脈粥樣硬化的特征[7]，但大鼠與人類共同屬於雜食類動物，更能真實地反映人體內的變化。本實驗應用高L-蛋氨酸飼料喂養大鼠，以複製血管內皮損傷大鼠的經典模型。實驗結果顯示，造模6周後，模型組與正常組相比有明顯差異：主動脈內皮細胞腫脹，局部有脫落現象，平滑肌排列紊亂，局部有增殖，符合血管內皮損傷，動脈粥樣硬化（AS）早期的病理學變化特征。內皮細胞損傷和功能障礙是AS形成的始動因素，也是AS病變的重要環節[8]。內皮細胞損傷的機製尚未完全明了，其中炎症和氧化應激學說受到廣泛重視[9]。各種致病因子的共同作用可引起內皮細胞的炎症和氧化應激損傷[10]，炎症和氧化應激又可互相加重，形成惡性循環，最終導致血管病變的發生。COX-2、COX-1和PCS為炎症反應相關的關鍵酶，組織中iNOS和SOD為氧化應激相關的關鍵酶，eNOS和ECE則是血管舒縮相關的關鍵酶。在本實驗中，分析這7組基因的表達變化，有助於在基因表達水平探討血管內皮損傷的內在機製。
辨證論治是中醫學的核心內容和基本特征，而證候則是中醫對疾病本質的認識和客觀把握。分析氣虛和氣滯兩種證型的血管病變中，內皮細胞內炎症和氧化應激損傷相關基因表達譜的變化，有助於分析氣虛和氣滯兩種證型在基因轉錄水平的異同，並為通心絡臨床治療有效性[11,12]提供實驗證據。
SAGE以構建能獨特代表基因轉錄本序列的標簽(Tag)為宗旨。Tag長度約9~14bp，同一Tag在某組織或細胞中出現的頻度反應了該Tag所代表基因在這種組織或細胞中的表達豐度[13]。SAGE文庫中所含的基因Tag可以將單細胞內≤5個拷貝數的轉錄本以量化的Tag數目反映出來，而且可以對同一個基因Tag在多種來源的SAGE文庫中進行表達量的比較，後者已被大量經典Northern Blot實驗所證實[14]。目前，NCBI提供了近100個SAGE文庫數據，為能找到代表性SAGE Tag的基因進行多組織/細胞間表達譜的量化分析、比較提供了良好的環境[15]。
本實驗中，經對炎症和氧化應激相關基因進行逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）半定量及SAGE譜分析，發現正常組COX-1、COX-2、iNOS、eNOS和ECE基因低表達，與SAGE譜基本一致；氣虛組COX-1、COX-2、iNOS、SOD、eNOS和ECE基因表達顯著增高，通心絡治療後，上述基因表達水平下降，PCS的表達水平升高；氣滯組COX-1、COX-2、iNOS、eNOS和ECE基因表達顯著增高，PCS和SOD的基因表達顯著降低，通心絡治療後，PCS和SOD基因表達增高，其餘基因表達降低。以上結果表明，氣虛和氣滯型血管病變中，這7組基因表達譜不盡相同，而通心絡則可以糾正這些異常的基因表達，使之趨於正常，從而保護內皮細胞免受損傷，起到防治氣虛和氣滯型血管病變的作用。相關基因的表達差異值的生物學意義尚須進一步研究。（參考文獻從略）
（葉子 整理）
