表2 100 μl通心絡影響EPC增殖能力（Ａ490 nm）變化的時效關係
表1 不同濃度通心絡幹預36小時對EPC增殖能力（A490 nm）與增殖率的影響
圖2 100 μl通心絡影響EPC增殖能力變化的時效關係增殖曲線
圖１ 不同濃度通心絡幹預36 小時對EPC增殖能力影響的量效關係增殖曲線
為研究中藥通心絡對體外培養的人體外周血內皮祖細胞（EPC）增殖的影響，上海第二軍醫大學長征醫院梁小衛、孫承波、王華、梁春、吳宗貴等通過觀察通心絡對體外培養的外周血EPC增殖影響的時效與量效關係，明確通心絡治療心血管疾病的臨床療效是否與其影響EPC相關，進一步探討該藥治療冠心病的機製。
通心絡促進人體外周血內皮祖細胞增殖的實驗研究
梁小衛等采用超聲溶解方法製備通心絡超微粉溶液，通過密度梯度離心法從外周血獲取單個核細胞，培養7 天後，洗去非貼壁細胞；采用激光共聚焦顯微鏡鑒定FITC-UEA-I和Dil-acLDL雙染色陽性細胞為正在分化的血管內皮祖細胞（EPC），並進一步通過流式細胞儀檢測其表麵標誌；貼壁細胞分別加入10、20、50、100、150、200 μl的通心絡超微粉溶液以不同時間（0、6、12、24、36 小時）繼續培養；通過觀察細胞形態及采用MTT比色法檢測通心絡對EPC增殖的影響。
各組實驗重複測量5次，計量資料用均數±標準差( ±S)表示，采用SPSS11．0軟件進行統計學處理，采用多個樣本均數間比較的方差分析, 組間的差異采用t檢驗，α=0.05為顯著性檢驗水準。
他們的研究獲得預期結果。有關EPC的鑒定、流式細胞儀檢測貼壁細胞表達CD34和CD133、EPC的生長及形態學改變，均與上述該院梁小衛等的通心絡對人體外周血EPC遷移和黏附功能影響的研究結果相一致。通心絡對EPC增殖影響的研究結果如下：
1. 不同濃度通心絡對外周血內皮祖細胞增殖的影響（圖1，表1）
通過MTT比色法檢測通心絡對EPC增殖功能的影響，結果顯示，與對照組比較，經不同濃度通心絡（20、50、100、150 μl）培養36 小時後，外周血EPC的增殖能力均明顯增強(P<0．05)，尤其是100 μl組達到最大值，增殖率為54.18%，但 200 μl組增殖能力明顯低於其他各組，與對照組無明顯差異。這提示，較高濃度的通心絡對細胞存在一定毒性作用。組間比較通心絡10 μl組與對照組無明顯差異（P＞0.05），其餘各組與前一濃度組均有顯著差異（P＜0.05）。
2. 100 μl通心絡對外周血內皮祖細胞增殖的影響（圖2, 表2）
根據量效關係的研究結果，采用100 μl的通心絡進行時效作用的研究。研究結果顯示，EPC增殖能力隨著時間推移逐漸增強，其中100 μl通心絡組6、12 小時EPC的擴增明顯高於對照組（P＜0.05），且24、36 小時時與對照組相比存在顯著統計學差異(均P<0．01)，36 小時達到高峰，條件培養基中各組間均存在顯著差異（P＜0.05）。以上結果表明，100 μl通心絡對外周血EPC增殖的影響存在明顯時效關係。
該實驗利用MTT法觀察了通心絡對人EPC增殖的作用。由於MTT為活細胞所攝取，能夠真實反映通心絡對EPC增殖的影響，同時整個過程在96孔板上原位進行，使實驗技術誤差減小，利用酶標儀可一次觀察多組不同濃度的通心絡對EPC增殖的作用，該方法快速、準確、操作簡便。
他們的研究結論是：通心絡能顯著增加體外培養的外周血來源的EPC數量，100 μl作用36 小時達到最大效應（增殖率為54.18% ，P＜0.01），但隨著濃度的增加，通心絡對EPC增殖作用的影響下降，提示通心絡能顯著改善外周血EPC的增殖能力，在一定濃度範圍內呈明顯的時效與量效關係。通心絡通過影響EPC數量，促進血管新生和內皮損傷後的修複過程，從而改善動脈粥樣硬化性疾病的臨床表現和預後。（未完待續）
糖尿病患者動脈粥樣硬化（AS）血管病變處，不僅有晚期糖基化終產物（AGE）的沉積，還有晚期糖基化終產物受體（RAGE）的高表達，提示AGE在糖尿病血管病變和AS的發生過程中起了重要作用。血管內皮祖細胞（EPC）通過修複內皮損傷在AS的進程中發揮著重要作用，但AS的危險因素如高齡和糖尿病可以降低循環血中EPC的數量和損害其功能，從而削弱其黏附、遷移以及再生能力。
第二軍醫大學附屬長征醫院孫承波、梁春、吳宗貴等研究發現，通心絡在體外可以促進EPC的增殖，而AGE在體外可以通過激活p38、Erk絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路，抑製EPC的增殖，促進其凋亡。
通心絡對晚期糖基化終產物誘導的內皮祖細胞
存活的影響及機製
孫承波等采用密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞，經體外培養誘導其分化為EPC。他們用Westen-blot檢測通心絡對糖基化人血清白蛋白（AGE-HSA）誘導的EPC MAPK通路，以及對RAGE表達的影響，並且觀察不同濃度的通心絡對AGE-HSA刺激的EPC增殖及凋亡的影響。
計量資料用均數±標準差（ ±S）表示，采用1-way ANOVA分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。
（未完待續）
