解偶聯蛋白2過表達張氏肝細胞構建

作者:小哲 摘編 來源:醫學論壇網 日期:12-05-25

  近日,大連醫科大學基礎醫學院生理教研室關莉莉、王耀鋒、宮德正等人共同發表論文,旨在構建穩定過表達人解偶聯蛋白2(UCP2)的張氏肝細胞株,觀察UCP2對線粒體膜電位(MMP)和活性氧(ROS)的作用。研究指出,成功構建穩定過表達人U CP2的張氏肝細胞株,UCP2表達水平及活性變化可通過MMP和ROS影響線粒體功能。該文發表在2012年第20卷第2期《中華肝髒病雜誌》上。

  將含有人UCP2 cDNA全長的重組質粒(pcDNA3.1-hU CP2)轉染張氏肝細胞係,pcDNA3.1空載體作為對照。Zeocin篩選穩定表達UCP2的細胞株,Western blot和免疫細胞化學鑒定UCP2蛋白表達。利用不同劑量UCP2抑製劑京尼平(25、50、100μmol/L),預處理穩定表達UCP2的細胞株。熒光分光光度法檢測MMP和ROS水平變化。數據分析用單因素方差分析和q檢驗(Newman-keuls法)。

  pcDNA3.1-hU CP2成功轉染張氏肝細胞,UCP2相對表達量約為對照組的1.6倍。過表達細胞羅丹明123和2′,7′——二氯氫化熒光素二脂熒光強度均明顯低於正常對照組張氏肝細胞和空載體對照組肝細胞;空載體組上述兩指標與正常對照組相比,差異均無統計學意義。京尼平低、中、高劑量組與過表達組相比,羅丹明123的熒光強度和2′,7′——二氯氫化熒光素二脂的熒光強度均明顯升高,並呈現劑量依賴性。

  相關鏈接:解偶聯蛋白2過表達張氏肝細胞的構建及其對線粒體膜電位和活性氧的影響

關鍵字:膜電位,線粒體,活性氧,解偶聯蛋白2,京尼平,張氏肝細胞

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