八色流式細胞術檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留病方法的建立

作者:陳小姣 整理 來源:醫學論壇網 日期:12-10-25

  日前,北京大學第一醫院、北京市道培醫院和北京軍區總醫院的研究人員共同發表論文,旨在建立八色流式細胞術(8c-FCM)檢測急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)微小殘留病(MRD)的方法,並進行初步驗證。本研究所建立的兩管8c-FCM新方法檢測骨髓中白血病細胞的重複性好、準確度高,可鑒別骨髓正常B淋巴係細胞群、B-ALL治療緩解後骨髓造血重建的B係前體細胞與MRD細胞群;和4c-FCM比較,兩管8c-FCM新方法的標本用量少,檢測速度快,能夠有效診斷B-ALL的MRD。該文章發表在2012 年35卷05期的《中華檢驗醫學雜誌》上。

  采用CD19/側向角散色光(SSC)、CD45/10和CD34(或cTdT)聯合設門,兩管八色抗體組合檢測B-ALL的MRD。將B-ALL細胞株Nalm-6細胞摻入正常人骨髓細胞中,使Nalm-6細胞占有核細胞比例為10.00%、1.00%、0.10%、0.01%和0.005%,采用已建立的8c-FCM,進行回收試驗和重複性試驗,評價檢測方法的準確度和精密度。檢測抗體標記Nalm-6後保存不同時間的熒光強度變化,評價各熒光抗體的穩定性。檢測並分析39份骨髓細胞免疫表型,包括對照者9例,初發或複發B-ALL患者9例,B-ALL化療或骨髓移植(BMT)後緩解期病例21例,評價8c-FCM方法檢測正常骨髓B淋巴係細胞群和B-ALL細胞的免疫表型結果,以及對B-ALL的MRD 檢測結果,並探討其與現用四色流式細胞術(4c-FCM)的可比性。

  建立了以CD19、CD45、CD10為主的兩管八色抗體組合檢測MRD的方法;當摻入的細胞株占有核細胞比例≥0.10%時,變異係數(CV)<2.5%,平均回收率為95.81%;當獲取106個細胞,Nalm-6細胞比例10.00% ~0.01%時,檢測到的Nalm-6細胞占骨髓有核細胞比例與實測值呈線性相關(r=0.99,P<0.05),該法檢測骨髓中Nalm-6細胞的靈敏度達到0.01%。Nalm-6細胞株標記抗體後隨時間延長略有降低,但24h內平均熒光強度減低<10%。應用該方法檢測骨髓中CD19陽性的B淋巴係細胞,對照組呈現4個連續發育階段,可分為4期:期CD45low/CD10stro/CD20 -/CD38stro/CD34+或cTdT+,Ⅱ期CD45 +/CD10+/CD20-/CD38stro/CD34+或cTdT+,Ⅲ期CD45 +/CD10 +/CD20-/CD38stro/CD34 -或cTdT-,Ⅳ期CD45stro/CD10 -/CD20 +/CD38low/CD34 -或cTdT -。初發和複發B-ALL患者骨髓中白血病細胞與對照組相比,均存在抗原表達異常;8c-FCM檢測B-ALL緩解組,有5例存在MRD,主要抗原表達與4c-FCM檢測結果一致,5例MRD細胞的範圍為0.02%~5.42%。
 

關鍵字:流式細胞術,急性淋巴細胞白血病,殘餘腫瘤

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