日前，浙江省人民醫院和複旦大學上海醫學院附屬華山醫院的研究人員共同發表論文，旨在製備氨基糖苷-3″-腺苷酰基轉移酶[AAD(3″)]特異性抗血清，並探討其在檢測第1類整合子8種不同可變區啟動子(PcS、PcH2、PcH1、PcW、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 -P2和PcW-P2)下遊基因盒中aadA2基因表達水平的應用價值。該研究成功純化出可溶性重組AAD(3″)蛋白，免疫大耳白兔獲得高效價的抗AAD(3″)特異性抗血清，為進一步研究整合子中整合酶基因與可變區基因盒表達之間的相互關係奠定基礎。不同可變區啟動子下遊耐藥基因盒的表達水平明顯不同，賦予宿主細菌對相應抗菌藥物的耐藥水平明顯不同,因此在對臨床菌株進行第1類整合子分子流行病學調查時，應重視可變區啟動子分類方麵的研究。該文章發表在2012 年35卷03期的《中華檢驗醫學雜誌》上。

　　用聚合酶鏈反應(PCR)擴增aadA2基因，並克隆至表達載體pET19b中，誘導表達並純化帶組氨酸標簽的重組AAD(3″)蛋白，免疫大耳白兔製備抗AAD(3″)特異性抗血清。以製備的抗AAD(3″)抗血清為一抗，用免疫印跡法(WB)檢測不同可變區啟動子下遊基因盒中aadA2基因的翻譯水平，用微量肉湯稀釋法檢測鏈黴素對含不同可變區啟動子及其下遊aadA2基因盒的大腸埃希菌JM109的最低抑菌濃度(MIC)。

　　成功構建重組的AAD(3″)蛋白表達質粒pET1 9b-aadA2,經測序確認轉化大腸埃希菌BL21( DE3)獲得1株高表達可溶性重組AAD(3″)蛋白的工程菌株，發酵後用鎳柱純化獲得純度＞90％的重組AAD(3″)蛋白，免疫大耳白兔獲得效價＞ 1∶100 000的抗AAD(3″)特異性抗血清。WB檢測8種不同可變區啟動子下遊aadA2基因翻譯產物AAD(3″)蛋白的表達水平，設定啟動子PcW下遊AAD(3″)蛋白的相對表達水平為1，重複3次測得啟動子PcS、PcH2、PcH1、PcS-P2、PcH2 -P2、PcH1-P2及PcW-P2下遊AAD(3″)蛋白相對表達水平依次為12.9±2.3、9.1±1.0、2.0±0.4、16.0±1.3、14.1±1.3、10.5±0.7、8.9±1.7，且不同可變區啟動子下遊AAD(3″)蛋白的相對表達水平差異具有統計學意義(F=32.421,P＜0.01)。微量肉湯稀釋法重複3次測得鏈黴素對含啟動子PcS、PeH2、PcH1、PcS-P2、PcH2-P2、PcH1 P2、PcW、PcW-P2及其下遊aadA2基因重組質粒的大腸杆菌JM109的MIC平均值依次為256、256、64、128、32、128、4、64 mg/L，表明不同可變區啟動子下遊aadA2基因的表達水平不同可賦予宿主細菌對鏈黴素產生不同水平的耐藥。