近日，中國醫學科學院北京協和醫學院北京協和醫院眼科和首都醫科大學附屬北京同仁醫院北京同仁眼科中心的研究人員共同發表文章，旨在觀察培養的大鼠結膜成纖維細胞中是否表達血管內皮生長因子(VEGF)及其受體(VEGFR)。研究表明，大鼠結膜成纖維細胞存在VEGF及其受體的基因表達，有VEGFR-1的蛋白表達，抗VEGF類藥物可能對大鼠的結膜成纖維細胞產生影響。該文發表在《中華眼科雜誌》2012 年第48卷第6期上。

　　實驗研究使用健康Sprague Dawley大鼠5隻，分別施行麻醉處死後，剪取球結膜組織，以組織塊法接種並培養成纖維細胞。通過熒光倒置顯微鏡觀察細胞培養情況，以間接免疫熒光法檢測波形蛋白、角蛋白表達水平，對所培養的成纖維細胞進行鑒定；設計VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)3種基因的RNA引物序列，以Trizol法提取成纖維細胞中mRNA，對目的片斷進行逆轉錄PCR擴增及凝膠電泳。擴增產物進行回收及測序，同時采用間接免疫熒光法檢測VEGFR-1的表達情況。利用熒光定量PCR法觀察培養的成纖維細胞中3種基因的熔解曲線和擴增曲線，同時采用間接免疫熒光法檢測VEGFR-1的表達情況。

　　結果顯示，大鼠結膜成纖維細胞中波形蛋白表達陽性，角蛋白表達陰性。逆轉錄PCR擴增後分別顯示VEGF164、Flt-1、Flk-1條帶，測序結果符合VEGF164、VEGFR-1(Flt-1)、VEGFR-2( Flk-1)基因序列。熒光定量PCR法檢測結果顯示上述基因均有陡直的擴增曲線，未見雜峰，指數擴增期均在30個循環內。免疫熒光法檢測VECFR-1蛋白表達陽性。