近日，賓夕法尼亞大學研究人員發現，癌細胞死亡受體信號通路在CAR-T耐藥中發揮重要的作用，可導致對CAR-T細胞的原發性耐藥，以及CAR-T細胞進行性功能受損。該研究發表於近日的《Cancer Discovery》期刊上。

CAR-T是一種新的免疫療法，通過對患者T細胞的基因修飾，使其能識別表達特定分子的癌細胞，然後再輸注到患者體內，增殖並殺傷患者體內癌細胞。

急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者對靶向CD19的CART19療法原發性耐藥率為10-20%，但其機製尚不清楚。而且，目前大多數研究都是圍繞著T細胞的缺陷展開的。該研究則發現，耐藥性的關鍵可能在於癌細胞的一個死亡信號通路，它導致癌細胞抗原持續存在，進而損傷T細胞功能，從而導致對CART19的耐藥性。

首先，研究人員利用CRISPR/Cas9技術，對Nalm6細胞(一種急性淋巴細胞白血病細胞係)進行了全基因組範圍的單基因功能缺失編輯，並與CART19細胞共培養24小時進行壓力選擇，進而分離並鑒定與耐藥性相關的信號通路。

通過全基因組敲除篩選CAR-T19耐藥性機製

研究人員發現，對CAR-T具有耐藥性的細胞，激活細胞死亡通路的基因都被耗竭，特別是FADD、BID、CASP8和TNFRSF10B基因。相反，一些拮抗細胞死亡通路的基因則得到富集，如CFLAR、TRAF2和BIRC2。而且，未能殺傷癌細胞的CAR-T的增殖受到了明顯的抑製。對FADD、BID基因的敲除的Nalm6細胞對化療藥物並沒有耐藥性，說明這種耐藥性是對T細胞特異的。

而且，在動物實驗中，這種現象比體外實驗更加明顯。在NSG小鼠體內，癌細胞的長期存活導致T細胞功能紊亂。

隨後，研究人員在tisagenlecleucel(Kymriah)治療ALL的兩個多中心臨床試驗(NCT02435849，NCT02228096)進行了驗證。通過對輸注前和輸注後CAR-T細胞和癌細胞的基因分析，以及對相應臨床結果的比較。研究人員發現，癌細胞中死亡受體基因表達的減少與CART19細胞功能降低、CART19細胞增殖，以及患者總體生存率降低密切相關。

急性淋巴細胞白血病(ALL)對CAR-T19耐藥性發生的示意圖

總之，該研究表明，CAR-T耐藥性的發生不僅僅是T細胞導致的(如患者自身T細胞功能的缺失)，癌細胞中死亡受體信號功能的失調直接導致了CAR-T細胞殺傷功能的降低，或許是CAR-T耐藥性的關鍵因素。

同時，研究人員推斷，對於同種異體CAR-T或通用型CAR-T(UCAR-T)，即采用健康供體的T細胞製備的CAR-T，也可能會遇到同樣的耐藥性問題。該研究為CAR-T療法的改進提供了重要的依據，同時也為針對癌細胞相關信號通路的治療提供了新的理念。