SEA和喉癌MAGE-A3基因重組真核共表達載體的構建和鑒定

作者:陳小姣 整理 來源:醫學論壇網 日期:13-01-30

  日前,廣州市第一人民醫院耳鼻咽喉科的吉曉濱、呂景禮和陳敬賢等人共同發表論文,旨在構建超抗原SEA和喉癌來源的MAGE-A3基因共表達的真核表達載體,檢測、鑒定其在293T細胞中的表達。此研究成功地構建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表達質粒,並能在293T細胞中有效表達MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作為抗喉癌DNA疫苗應用的基礎。該文章發表在2012年6卷18期的《中華臨床醫師雜誌》上。

  分別用RT-PCR方法及人工化學合成法獲得MAGE-A3和SEA基因片段,然後依次將MAGE-A3和SEA基因克隆至含內部核糖體進入位點的真核表達載體IRES序列的上、下遊,構建成重組質粒pMAGEA3-IRES-SEA。經脂質體轉染至293T細胞以後,用熒光定量PCR、蛋白免疫印跡分別鑒定SEA、MAGE-A3基因的表達。

  限製性內切酶酶切分析證實MAGE-A3基因和SEA基因均正確地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因測序結果與GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,實現了雙基因的正確重組。重組質粒轉染293T細胞後能檢測到MAGE-A3、SEA基因的高水平表達。

關鍵字:葡萄球菌類毒素,超抗原,喉腫瘤,真核載體,基因克隆,MAGE-A3

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