甲型流感病毒(IAV)是人類最重要的病原體之一，了解其生命周期是開發抗病毒策略的關鍵。然而，IAV脫殼是病毒感染的重要一步，至今仍難以理解。2019年1月9日，中科院武漢病毒所崔宗強團隊在國際權威期刊PNAS上發表了題為“Real-time dissection of dynamic uncoating of individual influenza viruses”的文章，該文章揭示了甲型流感病毒(IAV)的脫殼機製，有利於製定新的阻止感染的戰略。

在病毒感染過程中，脫殼是將病毒基因組釋放到宿主細胞中的必經步驟，這一步驟是一個重要的抗病毒靶點。然而，到目前為止，由於在檢測這一瞬態和動態事件的適用方法上的局限性，病毒的脫殼過程一直是一個很難理解的過程。在這篇文章裏，研究團隊用量子點(QD)的單粒子跟蹤來可視化單個甲型流感病毒(IAV)的衣殼。

構建包覆QD-vRNPs的IAV病毒

將生物素受體肽(AP)標記融合到與vRNP片段相關的PA蛋白上，PA-AP嵌合體蛋白可以被特異性地生物素化。然後將QD(SA-QD)與PA結合，在病毒組裝過程中將QD-vRNPs封裝成子代病毒。重組病毒rPR8-PA-AP與其他7個野生型(WT)PR8質粒共轉染293T細胞，重組rPR 8-PA-AP病毒具有與WT PR8病毒相似的傳染性，呈球形形態，與WT病毒在第1至第6代中可以很容易地檢測到重組的PA-AP片段，並且沒有突變。這些數據表明，重組病毒被成功地構建，其AP標記與PA的C末端融合，並保持了WT樣的傳染性。

利用IAV-QDs追蹤單個病毒的感染

在宿主細胞中加入IAV-QDs，追蹤病毒感染過程.當IAV-QDs在4°C與MDCK細胞共同孵育時，它們附著在細胞膜上。當免疫細胞用針對IAVM1蛋白的特異性抗體染色時，大多數QD信號與抗M1抗體信號共存，這進一步驗證了QD信號代表病毒粒子。根據實驗觀察可得，IAV-QDs首先在細胞周圍(第1期)緩慢移動，然後迅速向細胞核(第2期)遷移，然後在核周區域(第3期)緩慢和間歇性地運動。

因此，該研究在構建含QD感染的IAV和單粒子追蹤的基礎上，能夠跟蹤單個流感病毒的脫殼和vRNP動力學，揭示了重要的脫殼機製。

原始出處：

Chong Qin，et al.Real-time dissection of dynamic uncoating of individual influenza viruses.PNAS.January 9， 2019