吳宗貴教授

　　與相應對照組比較，*P>0．05；**P<0．01；TC：總膽固醇，TG：甘油三酯，LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇。

　　圖1 對照組左側頸動脈HE染色×40

　　圖2對照組右側頸動脈 HE染色×40

　　圖3通心絡組左側頸動脈 HE染色 ×40

　　圖4 通心絡組右側頸動脈 HE染色 ×40

　　圖5 對照組左側頸動脈 SP法DAB染色×100

　　圖6 對照組右側頸動脈 SP法DAB染色×100

　　圖7 通心絡組左側頸動脈 DAB染色×100

　　在第三屆國際絡病學大會上，有多項動物試驗結果公布，其內容主要涉及冠狀動脈早期炎症反應、血管內皮損傷、內膜增殖和通心絡幹預對氧化應激損傷、代謝綜合征及骨髓間充質幹細胞移植的影響等。這些研究報告使我們更新了許多舊的概念，開闊了眼界，開拓了思路，把我們帶入了更深、更廣的研究領域，並提高了認識起點。

　　據上海長征醫院吳宗貴教授報告，血管外膜也參與了動脈粥樣硬化（AS）的發生發展。血管外膜除了具有末梢神經和滋養血管外，還具有分泌功能。國外學者通過剝除兔頸動脈外膜的方法研究了血管外膜對血管內膜增生的影響，結果顯示，外膜剝除後內膜發生增生。

　　CD40和CD40配體係統作為重要的炎症信號通路，在AS發生和斑塊穩定中起重要作用。

　　通心絡超微粉是在絡病理論指導下研製的中藥複方製劑，由人參、水蛭、全蠍等多種純天然中藥精製而成，具有補益心氣、活血通絡的作用，適用於絡氣虛乏、血瘀絡阻患者，並能改善內皮功能，具有抗AS和穩定斑塊的作用，因此對冠心病AS性疾病有很好的防治作用。但其是否能抑製血管外膜損傷所致血管內膜AS斑塊形成及CD40表達？為此，劉永、湯月霞、梁春、吳宗貴等進行了一項動物試驗。

　　通心絡抑製兔血管外膜損傷致內膜AS斑塊形成及CD40表達的研究

　　動物模型製備及動脈外膜損傷方法

　　研究者將16隻雄性新西蘭大白兔隨機分為兩組：對照組（n=8）以蒸餾水灌胃；通心絡組（n=8）以通心絡［（0.3 g/kg・d）］混懸液灌胃。

　　以3％戊巴比妥予以兔麻醉後固定，行頸前正中切口分離雙側頸總動脈約4 cm ；采用0.2％Ⅱ型膠原酶包繞浸漬左側頸總動脈，浸漬30 min後鈍性剝除血管外膜；右側頸動脈不作外膜損傷。術後給以高脂飼料（含2％膽固醇，5％脂肪，餘為普通飼料）喂養12周。

　　標本提取及病理學檢測

　　於建模前及12周後，研究者經兔耳中心動脈采血5 ml，用全自動生化分析儀測血總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平；12周後在麻醉下活體狀態取雙側頸總動脈，置入10％福爾馬林中固定24小時，常規石臘包埋，4～6 μm 厚度連續切片；常規烤片、脫蠟、水化後進行HE染色，光鏡下觀察血管壁形態學變化，進行病理圖像分析（BIOQUANT―TCW98），測量管腔麵積以及內、外彈力板包繞麵積。以內彈力板包繞麵積減去管腔麵積為內膜麵積(I)，以外彈力板包繞麵積減去內彈力板包繞麵積為中膜麵積(M)。以I／M比值表示增生程度。

　　動脈標本CD40表達檢測

　　石蠟切片經幹燥箱烤片2小時後，常規脫蠟至水，3％過氧化氫滅活內源性過氧化物酶20分鍾，0.01M PBS洗滌，0.1 M枸櫞酸鹽緩衝液熱抗原修複，0.01 M PBS洗滌，滴加正常山羊血清封閉20分鍾。滴加一抗（CD40抗體），4℃過夜，0.01 M PBS洗滌後滴加生物素化偶聯的二抗，37℃孵育20分鍾，PBS洗滌3 分鍾×3次後滴加辣根過氧化物酶偶聯的鏈黴卵白素，37℃孵育20分鍾，PBS洗滌5分鍾×4次後滴加DAB室溫顯色。顯微鏡下控製顯色時間約5～8分鍾後蒸餾水洗滌，蘇木素輕度複染，脫水，封片。以PBS液替代一抗為陰性對照。確定免疫陽性染色的域值，固定不變，檢測CD40陽性染色的平均光密度(AOD)，以陽性染色麵積百分率代表CD40表達的相對含量。

　　統計學處理

　　采用 SPSS -l0.0 統計軟件包進行統 計學處理。所有資料均采用均數 ± 標準 差（ ± s ）表示，兩組間比較采用t檢驗,雙側P <0.05為有統計學顯著差異。

　　結果

　　血生化指標（表1）

　　試驗前兩組動物的各項血生化指標比較均無顯著差異(P＞0．05);第12周末，通心絡組的TC、LDL-C水平均顯著低於對照組(P＜0．05),TG無顯著差異(P＞0.05)。

　　病理形態觀察及定量分析

　　光鏡下對照組左側動脈管腔明顯變窄且大小不規則，內膜明顯增厚，脂質斑塊彌漫，內有大量泡沫細胞積聚，幾乎覆蓋於整個管腔表麵，中膜平滑肌細胞排列紊亂。相比，右側動脈內膜增厚及脂質斑塊情況較輕。通心絡組內膜增生相對較輕，斑塊較小（圖1～4）。定量分析顯示，通心絡組動脈內膜／中膜厚度比值小於對照組[(0.47±0.06)對(1．16±0.09)，P＜0.01]。

　　免疫組化檢測結果

　　通心絡組和對照組均可見染成棕黃色的CD40陽性表達信號，通心絡組信號強度明顯較對照組弱（圖5～8）。陽性表達信號主要存在於動脈粥樣硬化斑塊區，肩部表達更多。PBS代替CD40抗體對比試驗結果呈陰性。信號強度結果分析提示，通心絡組CD40信號強度顯著低於對照組[(0.17±0.04) 對 (0.36±0.07)，P＜0.01]。

　　討論

　　氣血相關的絡病理論認為，氣作為絡病理論的重要組成部分，可能涵蓋了西醫學神經內分泌免疫調節功能，提出“氣絡－NEI網絡”具有高度相關性和內在一致性的觀點。清代何夢瑤在《醫碥・氣》中所言：“氣一耳，以其行於脈外，則曰衛氣；行於脈中，則曰營氣”，血管外膜的損傷可看作血管局部“衛氣”受損， “氣絡－NEI網絡” 調控失常。該研究發現，通心絡可能是通過改善“氣絡－NEI網絡”，而發揮其抗AS作用的。這從一個側麵反映了“氣絡－NEI網絡”在絡病理論“脈絡－血管係統病”中的重要作用。

　　CD40和CD40配體係統作為重要的炎症信號通路，是AS發病的關鍵環節，與斑塊的發生和發展密切相關；阻斷CD40-CD40配體係統可抑製炎症反應，從而減輕動脈粥樣硬化病變。

　　在該研究中血管外膜損傷側有明顯的AS斑塊形成，而對側未損傷外膜的頸動脈未見AS病變形成。提示通心絡超微粉可以明顯抑製外膜損傷所致的AS斑塊形成和CD40表達。提示通心絡超微粉在降低血膽固醇水平和斑塊局部CD40表達的同時，可以明顯抑製因外膜損傷而致的AS斑塊形成，推測通心絡防治動脈粥樣硬化的作用可能與其降低膽固醇水平、抑製CD40係統有關。

　　（葉子　整理）