近期，西南醫科大學附屬醫院心胸外科研究人員發表論文，旨在探討重組慢病毒（lentivirus，LVs）介導Akt1基因轉染大鼠BMSCs能否提高細胞缺氧耐受能力，為提高幹細胞移植治療心肌梗死效果提供理論依據。研究指出，通過重組LVs介導Akt1基因轉染可通過抑製凋亡顯著提高BMSCs的缺氧耐受能力，從而為改善幹細胞移植治療心肌梗死效果提供新思路。該文發表在2016年第04期《中國修複重建外科雜誌》上。
以LVs作為轉染載體，增強綠色熒光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）為標記，構建攜帶Akt1基因的p LVX-EGFP-3FLAG病毒載體。取第3代3～5周齡SD大鼠BMSCs分別轉染p LVX-EGFP空白病毒液（B組）和p LVX-EGFP-3FLAG病毒液（C組），以未轉染病毒的BMSCs為空白對照組（A組）。轉染後2～3 d熒光顯微鏡觀察細胞綠色熒光表達情況，並於48 h時采用Western blot法檢測B、C組Akt1蛋白表達情況。將B、C組培養的BMSCs分別置於94%N2、1%O2和5%CO2缺氧箱進行缺氧幹預（分別為B1、C1組），取B1、C1組缺氧幹預0、3、6、9、12 h的細胞以膜聯蛋白V-FITC/碘化丙啶雙染法行流式細胞儀分析細胞凋亡率和死亡率、MTT法分析細胞增殖情況、Western blot法檢測凋亡相關基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）表達情況。
結果顯示， 轉染後A組熒光顯微鏡下未見綠色熒光表達，B、C組可見明顯綠色熒光，轉染效率約60%；Western blot可檢測到B、C組Akt1表達，且C組Akt1表達明顯高於B組（t=17.525，P=0.013）。B1組缺氧幹預後各時間點細胞凋亡率和死亡率均逐漸增高，差異有統計學意義（P<0.05）；C1組細胞凋亡率和死亡率在缺氧幹預後3 h短暫下降，之後逐漸增高，差異有統計學意義（P<0.05）。除0 h外，缺氧幹預各時間點C1組細胞凋亡率和死亡率均顯著低於B1組，差異有統計學意義（P<0.05）。MTT法檢測示，常氧條件下B、C組各時間點吸光度（A）值均顯著高於缺氧條件下B1、C1組（P<0.05），C組各時間點A值均顯著高於B組（P<0.05），缺氧幹預後6、9、12 h B1組A值顯著低於C1組（P<0.05）。Western blot法檢測示，與B1組比較，C1組缺氧幹預各時間點Caspase-3表達均顯著下調（P<0.05）。
